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5-Methyltetrahydrofolat ist die biologisch aktivste und funktionellste Form der Folsäure.Nur so kann Folsäure am physiologischen Stoffwechsel teilnehmen.Es ist außerdem die einzige Form freier Folsäure, die in tierischem Plasma und Zellen vorkommt.Es wird hauptsächlich als Wirkstoff in Arzneimitteln und Lebensmittelzusatzstoffen zur Vorbeugung von fetalen Neuralrohrdefekten und Arteriosklerose, zur Behandlung von Megaloblastenanämie, zur Verstärkung der therapeutischen Wirkung von fluoriertem Pyrimidin und zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen wie Psoriasis und rheumatoider Arthritis verwendet.