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Biologische Aktivität: BCIP (BCIP p-Toluidinsalz; X-Phosphat p-Toluidinsalz) ist ein chromogenes Substrat für den kolorimetrischen Nachweis der alkalischen Phosphataseaktivität.

Shiga-Toxine (Stxs) werden von enterohämorrhagischen Escherichia coli (EHEC) produziert, die beim Menschen Infektionen mit oft tödlichem Ausgang verursachen.Vero-Zelllinien, die aus der Niere der Grünen Meerkatze gewonnen werden, stellen den Goldstandard für die Bestimmung der zytotoxischen Wirkung von Stxs dar.Trotz ihrer weltweiten Verwendung ist das Wissen über die genauen Strukturen der Stx-Rezeptor-Glycosphingolipide (GSLs) und ihre Anordnung in Lipidflößen dürftig.Hier präsentieren wir eine umfassende Strukturanalyse von Stx-Rezeptor-GSLs und ihrer Verteilung auf waschmittelresistente Membranen (DRMs), die aus Vero-B4-Zellen hergestellt und als Lipid-Raft-Äquivalente verwendet wurden.Wir identifizierten Globotriaosylceramid (Gb3Cer) und Globotetraosylceramid (Gb4Cer) als GSL-Rezeptoren für die Subtypen Stx1a, Stx2a und Stx2e mithilfe der TLC-Overlay-Detektion in Kombination mit MS.Der ungewöhnliche Stx-Rezeptor Globopentaosylceramid (Gb5Cer, Galβ3GalNAcβ3Galα4Galβ4Glcβ1Cer), der (zusätzlich zu Gb3Cer und Gb4Cer) spezifisch von Stx2e erkannt wurde, wurde vollständig strukturell charakterisiert.Es wurde festgestellt, dass Lipoformen von Stx-Rezeptor-GSLs hauptsächlich Ceramideinheiten enthalten, die aus Sphingosin (d18:1) und C24:0/C24:1- oder C16:0-Fettsäure bestehen.Darüber hinaus deutete das gleichzeitige Auftreten von Lipid-Raft-Markern, SM und Cholesterin, in DRMs auf eine GSL-Assoziation mit Membranmikrodomänen hin.Diese Studie liefert die Grundlage für die weitere Untersuchung des funktionellen Einflusses von Lipid-Raft-assoziierten Stx-Rezeptoren auf die Toxin-vermittelte Schädigung von Vero-B4-Zellen.