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Eine verbesserte Stickstoffverwertung bei Rindern ist wichtig, um eine nachhaltige Rinderproduktion sicherzustellen.Da Purine und Pyrimidine (PP) einen erheblichen Teil des Pansenstickstoffs ausmachen, ist ein besseres Verständnis der Absorption und des Zwischenstoffwechsels von PP unerlässlich.Die vorliegende Arbeit beschreibt die Entwicklung und Validierung einer empfindlichen und spezifischen Methode zur gleichzeitigen Bestimmung von 20 Purinen (Adenin, Guanin, Guanosin, Inosin, 2'-Desoxyguanosin, 2'-Desoxyinosin, Xanthin, Hypoxanthin), Pyrimidinen (Cytosin, Thymin, Uracil, Cytidin, Uridin, Thymidin, 2'-Desoxyuridin) und deren Abbauprodukte (Harnsäure, Allantoin, β-Alanin, β-Ureidopropionsäure, β-Aminoisobuttersäure) im Blutplasma von Milchkühen.Die auf Hochleistungsflüssigkeitschromatographie basierende Technik gekoppelt mit Elektrospray-Ionisations-Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) wurde mit individuellen, auf die Matrix abgestimmten Kalibrierungsstandards und stabilen isotopenmarkierten Referenzverbindungen kombiniert.Der quantitativen Analyse ging ein neuartiges Vorbehandlungsverfahren voraus, das aus Ethanolfällung, Filtration, Verdampfung und Rekonstitution bestand.Es wurden Parameter zur Trennung und Detektion während der LC-MS/MS-Analyse untersucht.Es wurde bestätigt, dass die Verwendung eines Log-Kalibrierungsmodells anstelle eines linearen Kalibrierungsmodells zu einem niedrigeren CV% führte und ein fehlender Anpassungstest eine zufriedenstellende lineare Regression zeigte.Die Methode deckt Konzentrationsbereiche für jeden Metaboliten ab, die denen in tatsächlichen Proben entsprechen, z. B. Guanin: 0,10–5,0 μmol/L und Allantoin: 120–500 μmol/L.Der CV% für die gewählten Quantifizierungsbereiche lag unter 25 %.Die Methode weist eine gute Wiederholbarkeit (CV % ≤ 25 %) und eine mittlere Präzision (CV % ≤ 25 %) sowie hervorragende Wiederfindungen (91–107 %) auf.Alle Metaboliten zeigten eine gute Langzeitstabilität und eine gute Stabilität innerhalb der Läufe (VK % ≤ 10 %).In Plasma, Urin und Milch wurden unterschiedliche Ausmaße an absoluten Matrixeffekten beobachtet.Die Bestimmung der relativen Matrixeffekte ergab, dass die Methode für fast alle untersuchten PP-Metaboliten in Plasma aus einer Arterie und den Pfortader-, Leber- und Magen-Spleen-Venen und mit wenigen Ausnahmen auch für andere Tierarten wie Huhn, Schwein, Nerz, Mensch und Ratte.